1.2. Место и время отбора пробы определяют в зависимости от цели анализа в наиболее характерных точках водопроводной сети: ближайших к насосной станции, наиболее удаленных от нее, наиболее возвышенных, в тупиках, а также в точках, качество воды в которых вызывает сомнение.

1.5. Отобранные пробы должны сопровождаться документом, содержащим:
     
     точное наименование этапа очистки и обеззараживания;
     
     при отборе проб из периферической водопроводной сети - точное месторасположение крана, из которого отбирают пробу;
     
     дату отбора пробы (с указанием года, месяца, числа и часа);
     
     особые обстоятельства, имевшие место при отборе проб (время спуска воды из крана, условия транспортирования и т.п.);
     
     цель исследования: сделан ли отбор пробы в порядке текущего санитарного надзора или по особым показаниям (рекомендации санитарно-эпидемиологической службы; сигналы, поступающие от населения, об изменении органолептических качеств воды и т.п.).
     
     Все сопроводительные документы должны быть подписаны лицом, отбиравшим пробу, с указанием его места работы и должности.

2.1. Для проведения анализа должны применяться следующие аппараты, реактивы и питательные среды:
....
прибор для счета колоний бактерий;
     
     термостаты электрические для выращивания бактерий с автоматическим терморегулятором до 50 °С и с термометром с ценой деления 0,2 °С;
3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

     3.1. Подготовка посуды и материалов
     
3.1.1. Вся бактериологическая посуда должна быть перед стерилизацией тщательно вымыта и высушена.
3.2. Стерилизация посуды
     

3.2.1. Подготовленную посуду стерилизуют сухим жаром в сушильном шкафу при (160±5) °С в течение 1 ч, считая с момента достижения этой температуры. Флаконы с привязанными к ним каучуковыми пробками стерилизуют отдельно в автоклаве при (126±2) °С (1,47·10ГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2) Па) 30 мин.
3.3.15. Приготовление реактива для определения оксидазной активности бактерий
     

30-40 мг ГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2)-нафтола растворяют в 2,5 смГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2) ректификованного этилового спирта, прибавляют 7,5 смГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2) дистиллированной воды и растворяют 40-60 мг диметил-ГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2)-фенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением.
     
     Оксидазный тест предназначается для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активным ферментом оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола ярко-синего цвета.
3.3.15.1. Постановка оксидазного теста при работе методом мембранных фильтров
     
     Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги несколько большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом. Через 2-4 мин определяют результат. Все посиневшие колонии или с синим ободком не относятся к семейству Enterobacteriaceae, их учитывают.
     
     Колонии, не изменившие своего первоначального цвета, в подавляющем большинстве образованы бактериями группы кишечных палочек, но среди них могут быть кокки, спорообразующие и грамотрицательные палочки, не имеющие санитарно-показательного значения, которые не учитывают после микроскопирования и отсутствия образования газа на полужидкой среде с глюкозой при (37±0,5) °С. Учитывая бактерицидность реактива для определения оксидазной активности, мембранный фильтр сразу же после четкого проявления реакции переносят обратно на среду Эндо и немедленно (не позднее чем через 5 мин) пересеивают оксидазоотрицательные колонии в полужидкую среду с глюкозой.
4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

  4.1. Определение общего количества бактерий в воде
     
     Сущность метода заключается в определении в 1 смГОСТ 18963-73 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа (с Изменениями N 1, 2) воды общего содержания мезофильных, мезотрофных аэробов и факультативных анаэробов, способных расти на питательном агаре данного состава при температуре (37±0,5) °С в течение (24±2) ч, образуя колонии, видимые при увеличении в 2-5 раз.

4.1.13. Окончательный результат вносят в протокол анализа или в журнал регистрации, где должны быть приведены сведения из сопроводительного документа к пробе воды. Кроме того, отмечают особые обстоятельства анализа (превышение срока хранения пробы, изменение температуры и времени инкубации посевов, применение заменителей при приготовлении питательных сред и прочие вынужденные отклонения).
     

4.2. Определение количества бактерий группы кишечных палочек
     
     К бактериям группы кишечных палочек относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при (37±0,5) °С в течение 24-48 ч или сбраживающие глюкозу с образованием кислоты и газа при (37±0,5) °С в течение 24 ч и не обладающие оксидазной активностью.
     
     Обнаружение в воде бактерий группы кишечных палочек следует рассматривать как показатель фекального загрязнения воды, а их количество позволяет судить о степени этого загрязнения.
4.2.8. При наличии на фильтрах колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском и без него, розовых, прозрачных), из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках грамотрицательных неспороносных палочек дает отрицательный ответ. Анализ на этом заканчивают через 18-24 ч.
     

4.2.9. При наличии в мазках грамотрицательных, коротких, полиморфных, не образующих спор палочек (возможны удлиненные нитевидные формы, а также крупные палочки, полярно окрашенные) выполняют оксидазный тест (п.3.3.15.1).
     

4.2.10. Наличие активной оксидазы у всех колоний, кроме перечисленных в п.4.2.7, позволяет дать отрицательный результат.
     

4.2.11. Отсутствие оксидазы у темно-красных с металлическим блеском и без него (лактозоположительных) колоний позволяет отнести их к бактериям группы кишечных палочек и немедленно дать положительный ответ.
     
     Анализ питьевой воды может быть завершен на этом этапе, если нет других колоний, не обладающих оксидазной активностью.

4.3. Дополнительные исследования на наличие бактерий - показателей свежего фекального загрязнения
     
     При обнаружении бактериального загрязнения воды свыше допустимых норм проводят повторный отбор проб с дополнительным их исследованием на наличие бактерий - показателей свежего фекального загрязнения.
     
     Свежее фекальное загрязнение в воде устанавливают, определяя наличие кишечных палочек (преимущественно Escherichia coli), обладающих способностью ферментировать лактозу до кислоты и газа при (43±0,5) °С в присутствии ингибиторов посторонней микрофлоры.