отрывки из интервью . Технические вопросы обсуждаются. Усвоить их — не самое простое упражнение, которое вы когда-либо делали, но я верю, что серьезный читатель сможет понять жизненно важные основы.
Кристин Джонсон: ВИЧ вызывает СПИД?
Элени Пападопулос: Нет никаких доказательств того, что ВИЧ вызывает СПИД.
КД: Почему бы и нет?
ЭП: По многим причинам, но самое главное, потому что нет доказательств существования ВИЧ.
… CJ: Разве Люк Монтанье и Роберт Галло [предположительно первооткрыватели ВИЧ] не изолировали ВИЧ еще в начале восьмидесятых?
ЭП: Нет. В статьях, опубликованных в журнале Science этими двумя исследовательскими группами, нет доказательств выделения ретровируса от больных СПИДом. [Говорят, что ВИЧ является ретровирусом.]
CJ: Они говорят, что изолировали вирус.
ЭП: Наша интерпретация данных отличается. Чтобы доказать существование вируса, вам нужно сделать три вещи. Во-первых, культивируйте клетки и найдите частицу, которая, по вашему мнению, может быть вирусом. Очевидно, что по крайней мере эта частица должна выглядеть как вирус. Во-вторых, вы должны разработать метод, чтобы получить эту частицу саму по себе, чтобы вы могли разобрать ее на части и точно проанализировать, из чего она состоит. Затем вам нужно доказать, что частица может создавать точные копии самой себя. Другими словами, что он может воспроизводиться.
CJ: Разве вы не можете просто посмотреть в микроскоп и сказать, что в культурах есть вирус?
ЭП: Нет, нельзя. Не все частицы, похожие на вирусы, являются вирусами.
… CJ: Насколько я понимаю, высокоскоростное центрифугирование используется для получения образцов, состоящих исключительно из объектов, имеющих одинаковую плотность, так называемого «образца, очищенного по плотности». Электронная микроскопия используется, чтобы увидеть, состоят ли эти очищенные по плотности образцы из объектов, имеющих одинаковый внешний вид — в этом случае образец является изолятом — и соответствует ли этот внешний вид внешнему виду ретровируса с точки зрения размера, формы и т. д. вперед. Если все это правда, то вы прошли три этапа процедуры получения ретровирусного изолята. (1) У вас есть изолят, и этот изолят состоит из объектов с такой же (2) плотностью и (3) внешним видом ретровируса. Затем вы должны дополнительно изучить этот изолят, чтобы увидеть, содержат ли содержащиеся в нем объекты обратную транскриптазу [фермент] и будут ли они реплицироваться при помещении в новые культуры.
ЭП: Точно. Было обнаружено, что ретровирусные частицы обладают физическим свойством, позволяющим отделять их от другого материала в клеточных культурах. Этим свойством является их плавучесть или плотность, и это было использовано для очистки частиц с помощью процесса, называемого центрифугированием в градиенте плотности.
Технология сложная, но концепция предельно проста. Вы готовите пробирку, содержащую раствор сахарозы, обычного столового сахара, приготовленный таким образом, чтобы раствор был светлым вверху, но постепенно становился тяжелее или гуще к низу. Тем временем вы выращиваете любые клетки, которые, по вашему мнению, могут содержать ваш ретровирус. Если вы правы, ретровирусные частицы высвобождаются из клеток и попадают в культуральные жидкости. Когда вы думаете, что все готово, вы декантируете образец культуральной жидкости и осторожно капаете поверх раствора сахара. Затем вы вращаете пробирку на очень высоких скоростях. Это создает огромные силы, и частицы, присутствующие в этой капле жидкости, проталкиваются через раствор сахара до тех пор, пока не достигают точки, в которой их плавучесть не позволяет им проникнуть дальше. Другими словами, они дрейфуют вниз по градиенту плотности, пока не достигают места, где их собственная плотность равна плотности этой области раствора сахара. Когда они добираются туда, они останавливаются, все вместе. Используя вирусологический жаргон, вот где они объединяются. Ретровирусы имеют полосу в характерной точке. В растворах сахарозы они образуют полосы в точке, где плотность составляет 1,16 г/мл.
Затем эту полосу можно выборочно выделить и сфотографировать с помощью электронного микроскопа. Снимок называется электронной микрофотографией, или ЭМ. Электронный микроскоп позволяет увидеть частицы размером с ретровирус и охарактеризовать их внешний вид.
CJ: Итак, исследование с помощью электронного микроскопа говорит вам, какую рыбу вы поймали?
ЭП: Не только это. Это единственный способ узнать, поймали ли вы рыбу. Или вообще что угодно.
CJ: Это сделали Монтанье и Галло?
ЭП: Это одна из многих проблем. Монтанье и Галло действительно использовали полосатую градиентную плотность, но по какой-то неизвестной причине они не опубликовали ни одной Эмс [фотографии] материала с концентрацией 1,16 г/мл… из которых сейчас входят в число ведущих специалистов по ВИЧ. На этом совещании подробно обсуждался метод выделения ретровирусов, и фотографирование полосы градиента плотности 1,16 считалось совершенно необходимым.
КД: Но Монтанье и Галло опубликовали фотографии вирусных частиц.
ЭП: Нет. Монтанье и Галло опубликовали электронные микрофотографии культуральных жидкостей, которые не были центрифугированы или даже отделены от культуральных клеток, если уж на то пошло. Эти ЭМ содержали, в дополнение ко многим другим вещам, включая культуральные клетки и другие вещи, которые явно не являются ретровирусами, несколько частиц, которые, как утверждали Монтанье и Галло, являются ретровирусами, и все они принадлежали к одному и тому же ретровирусному виду, теперь называемому ВИЧ. Но фотографии неочищенных частиц не доказывают, что эти частицы являются вирусами. Существование ВИЧ не было установлено Монтанье и Галло — или кем-либо после — с помощью метода, представленного на встрече 1973 года.
CJ: И что это был за метод?
ЭП: Все шаги, которые я вам только что рассказал. Единственный существующий научный метод. Культивируйте клетки, найдите частицу, изолируйте частицу, разберите ее на части, узнайте, что внутри, а затем докажите, что эти частицы способны производить больше того же самого с теми же составляющими, когда их добавляют в культуру неинфицированных клеток.
КД: Значит, до появления СПИДа существовал проверенный метод доказательства существования ретровируса, но Монтанье и Галло не следовали этому методу?
ЭП: Они использовали некоторые методы, но не предпринимали всех шагов, включая доказательство того, какие частицы, если таковые имеются, находятся в полосе 1,16 г/мл градиента плотности, плотности, которая определяет ретровирусные частицы.
CJ: А как насчет их фотографий?
ЭП: Электронные микрофотографии Монтанье и Галло… представляют собой целые клеточные культуры или неочищенные жидкости из культур…
—конец отрывка интервью—
